[BA202400144]人參益元顆粒對(duì)化療后免疫功能低下大鼠及Lewis荷瘤小鼠瘤體生長(zhǎng)和免疫功能的影響備案公示公告(更正) - 千里馬招標(biāo)網(wǎng)

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    [BA202400144]人參益元顆粒對(duì)化療后免疫功能低下大鼠及Lewis荷瘤小鼠瘤體生長(zhǎng)和免疫功能的影響備案公示公告(更正)

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    2024年03月15日
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    [****]人參益元顆粒對(duì)化療后免疫功能低下大鼠及Lewis荷瘤小鼠瘤體生長(zhǎng)和免疫功能的影響備案公示公告(更正)
    發(fā)布時(shí)間:2024-03-15 16:10:29
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    ****人參益元顆粒對(duì)化療后免疫功能低下大鼠及Lewis荷瘤小鼠瘤體生長(zhǎng)和免疫功能的影響
    第一醫(yī)院****醫(yī)學(xué)院)吳荻
    123000.00 人民幣123000.00 人民幣
    ****24 月
    **省-**市-****開發(fā)區(qū)自由大路6426號(hào) 采購單位 ********醫(yī)學(xué)院)
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    135****17902024年04月01日 至 2024年06月01日
    **省-**市-****開發(fā)區(qū)自由大路6426號(hào)
    以成交單為準(zhǔn),參考相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行驗(yàn)收。驗(yàn)收程序以甲方職能部門規(guī)定為準(zhǔn)。
    1.****實(shí)驗(yàn)室服務(wù)后,****應(yīng)根據(jù)我方要求,真實(shí)、及時(shí)的進(jìn)行試驗(yàn)并出具試驗(yàn)報(bào)告,應(yīng)確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。 2.根據(jù)現(xiàn)行有效標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)程、規(guī)范及進(jìn)度進(jìn)行檢測(cè)。并對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)及檢測(cè)報(bào)告負(fù)責(zé),如果我方對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在異議,及時(shí)向****提出,****應(yīng)積極處理并提供解決方案。 3.****應(yīng)保持對(duì)我方提供的實(shí)驗(yàn)方案和相關(guān)信息的保密,不得向任何第三方披露或泄露。除非獲得我方書面同意或法律法規(guī)另有規(guī)定。
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    其他研究和試驗(yàn)開發(fā)服務(wù)測(cè)試加工費(fèi)
    項(xiàng)1
    ¥123,000.00¥123,000.00
    實(shí)驗(yàn)一 (一)研究?jī)?nèi)容 觀察人參益元顆粒對(duì)Lewis荷瘤小鼠瘤體生長(zhǎng)和免疫功能的影響。 成人每日14g(小鼠:12.33*14g/60kg=2.88g/kg) (二)研究方法 1. 實(shí)驗(yàn)材料 1.1實(shí)驗(yàn)細(xì)胞 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞采用小鼠Lewis肺癌細(xì)胞細(xì)胞株。細(xì)胞株使用含10%胎牛血清和1%青鏈霉素的高糖 DMEM培養(yǎng)基,在5%CO2、37℃條件下培養(yǎng),穩(wěn)定傳代至4-5代備用。 1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購自于**維通利華****公司,采用8周齡C57BL/6J雌性小鼠,55只,體重18-20g。 2實(shí)驗(yàn)方法 2.1皮下接種 用PBS將Lewis細(xì)胞制備成細(xì)胞懸液,根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整細(xì)胞懸液濃度至指定濃度(在5×106 /mL上下選擇,需要根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定該批細(xì)胞株增殖活性)。 在超凈臺(tái)上操作,用75%酒精消毒C57BL/6小鼠右腋窩部皮膚,準(zhǔn)備細(xì)胞接種注射前使用移液槍將預(yù)先配制好的細(xì)胞懸液充分吹散,用注射器吸取Lewis肺癌細(xì)胞細(xì)胞懸液0.2mL,針頭輕輕刺入皮下,推入腫瘤細(xì)胞懸液。 2.2人參益元藥液配制 本研究使用的人參益元顆粒由****制劑室提供,藥物組成:黃人參、黃芪、佛手、白芍、雞血藤、甘草,規(guī)格:每袋裝10g,一次1袋,一日1次。稱量2.88g,蒸餾水定容至10mL。 2.3動(dòng)物分組及干預(yù) 隨機(jī)選取10只小鼠作為空白對(duì)照組,其余小鼠接種Lewis細(xì)胞,接種后1周,檢查小鼠成瘤情況,用手指輕輕觸摸小鼠右側(cè)腋下皮膚,若接種成功則可觸及約黃豆粒大小的結(jié)節(jié)。選取造模成功的荷瘤小鼠40只,按體質(zhì)量隨機(jī)分為4組(每組10只):中藥組、順鉑組、中藥聯(lián)合順鉑組(中西藥組)和模型組。從接種后第8天開始,給予荷瘤小鼠相應(yīng)藥物干預(yù): ①對(duì)照組:按10mL/kg每日灌服蒸餾水,連續(xù)灌胃21天,并從第1天開始隔天腹腔注射生理鹽水0.4ml; ②模型組:按10mL/kg每日灌服蒸餾水,連續(xù)灌胃21天,并從第1天開始隔天腹腔注射生理鹽水0.4ml; ③順鉑組:從第1天開始,隔天腹腔注射順鉑注射液0.4ml(濃度2mg/kg),共注射10次,同時(shí)按10mL/kg每日灌服蒸餾水21天; ④中藥組:從第1天開始每日灌胃人參益元顆粒10mL/kg,連續(xù)灌胃21天,并隔天腹腔注射生理鹽水0.4ml,共注射10次; ⑤中西藥組:按照人參益元顆粒10mL/kg每日連續(xù)灌胃21天,同時(shí)隔天腹腔注射順鉑注射液0.4ml,共10次。 3.觀測(cè)指標(biāo) 3.1一般觀察和體重 每天檢查小鼠的體重和一般情況,包括行為、皮毛狀態(tài)、食物攝入量和排便情況。 3.2瘤體體積測(cè)量 分別于干預(yù)周期的第1、4、7、10、14、20天,用電子游標(biāo)卡尺測(cè)量各組小鼠皮下腫瘤的長(zhǎng)徑和短徑,根據(jù)長(zhǎng)徑(a)和短徑(b)來計(jì)算腫瘤體積,計(jì)算公式為:V(cm3)=ab2/2,以干預(yù)天數(shù)為橫軸,小鼠腫瘤體積為縱軸,繪制各組小鼠的腫瘤生長(zhǎng)曲線。(每組10只) 3.3腫瘤組織HE染色 將各組小鼠皮下移植瘤剝離后制成組織切片,采用HE染色方法對(duì)腫瘤組織 進(jìn)行染色,以觀察其組織細(xì)胞形態(tài)。(每組三只,切片做全掃描) 3.4計(jì)算抑瘤率 各組進(jìn)行干預(yù)21天后脫頸椎處死小鼠,完整剝?nèi)⌒∈笥覀?cè)腋部腫瘤組織,濾紙吸干瘤體表面后立即采用精密電子天平稱取腫瘤質(zhì)量,并進(jìn)行瘤體拍照。根據(jù)腫瘤質(zhì)量計(jì)算各組抑瘤率,抑瘤率=(模型組平均瘤質(zhì)量一藥物干預(yù)組平均瘤質(zhì)量)/模型組平均瘤質(zhì)量×100%。(每組10只) 3.5外周血和淋巴細(xì)胞(PBMC)的測(cè)定 給藥21天后,取小鼠眼窩靜脈血樣。用全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)白細(xì)胞(WBC)、血小板(PLT)、紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(HGB)及淋巴細(xì)胞(PBMC)。(每組5只) 3.6免疫器官指數(shù) 處死小鼠前先進(jìn)行眼球采血,眼球采血后處死小鼠,盡量完整摘取胸腺及脾臟,沖洗并用濾紙吸干水分后稱重。胸腺及脾臟指數(shù)計(jì)算公式:胸腺指數(shù)=(胸腺重量(mg)×1000)/小鼠體重(g),脾臟指數(shù)=(脾臟重量(mg)×1000)/小鼠體重(g)。(每組10只) 3.7 免疫相關(guān)指標(biāo)檢測(cè) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)脾臟中CD4+、CD8+以及CD4/CD8水平;(每組3只) ELISA法檢測(cè)外周血和脾臟中相腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及干擾素-γ(IFN-γ) 含量。(每組5只) 預(yù)算: 測(cè)試加工費(fèi):75000 實(shí)驗(yàn)二 1、人參益元顆粒在小鼠體內(nèi)對(duì)放化療所致的免疫功能低下的拮抗作用 雄性SD大鼠40只,隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組及人參益元顆粒低、中、高劑量干預(yù)組共5組,每組8只,稱重并標(biāo)記。 (1)免疫低下模型建立:實(shí)驗(yàn)第1d至第7d,模型組及各治療組采用腹腔注射20mg/mL 的CTX注射液,按40mg/kg,首次加倍,隔天1次,連續(xù)4次的造模方法,正常對(duì)照組用等體積的生理鹽水代替。 (2)動(dòng)物給藥:第1d至第21d,藥物治療組在免疫抑制同時(shí)分別給予不同劑量人參益元藥液灌服,高劑量組2.88g/kg,中劑量組1.44 g/kg ,低劑量組0.72 g/kg ,灌胃體積均為10 mL/kg ,灌胃1次/日,正常對(duì)照組和模型組大鼠每天予等量蒸餾水灌胃。 (3)檢測(cè)指標(biāo)。 ①流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血中CD3+、CD4+;(每組8只) ②ELISA法檢測(cè)外周血相關(guān)免疫細(xì)胞因子腫瘤壞死因子-α(TNF-α)及干擾素-γ(IFN-γ) 含量;(每組8只) ③Western blot 檢測(cè)脾組織TNF-α蛋白的表達(dá);(每組3只) ④外周血淋巴細(xì)胞(PBMC)的測(cè)定全自動(dòng)血液分析儀檢測(cè)白細(xì)胞(WBC)、血小板(PLT)、紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(HGB)及淋巴細(xì)胞(PBMC)。(每組8只) 預(yù)算: 測(cè)試加工費(fèi):48000 實(shí)驗(yàn)結(jié)果以報(bào)告形式提供,提供所試劑儀器等信息,數(shù)據(jù)形成表格以及PRISM軟件繪制的柱狀圖,病理圖等,可提供分析軟件的文件,用以后期自由調(diào)整結(jié)題材料和論文的圖信息。
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